Hallo,
ich möchte hier einfach mal kurz meine Ergebnisse eines - in meinen Augen sehr schönen Versuches zur Diskussion stellen.
Der Versuch lässt sich leicht in wenigen Tagen durchführen lässt. Alle Aufnahmen entstanden daheim, also nichts was man nur an einer Uni o. Ä. machen kann. (Ich erhebe nicht den Anspruch das der Versuch in die Sammlung wander, nur nebenbei)
In dem Versuch wird Prodigiosin aus dem Mikroorganismus
Serratia marcescens isoliert. Prodigiosin ist blutrot im sauren (wenn es konzentriert ist, dazu reicht schon Kohlensäure oder schwache Fettsäuren) und gelb im alkalischen. Der Keim wächst auch auf Brot und wird so für das ein oder andere Blutwunder in der kirchlichen Geschichte verantwortlich gemacht.
Da ich sehr wenig Zeit habe Zeit (60 h / Woche Fulltimejob) gibt es hier einfach mal unkommentiert eine Darstellung mit Bildern. Die Sachen sind eigentlich fast selbsterklärend, ansonsten stehe ich für Fragen aber gerne zur Verfügung!
Nach etwa 48 h Kultur in LB Medium wurden Zellen und Überstand durch Zentrifugation getrennt. Der Überstand wurde einmal im Verhältnis 1:1 kalt extrahiert, die das Bakterienpellet unter gelegentlichem vortexen im 60 °C Wasserbad.
Die vereinigten Extrakte wurden im WB unter Zuführung eines leichten Luftstromes auf > 2ml eingetrocknet (siehe Bild) und nochmal zentrifugiert.
Extrahiert wurde mit einer 1:1 Mischung aus Ethylacetat und Aceton, die Spektren wurden aber in saurem / basischem Ethanol aufgenommen (100 µl des Rohextrakts durch einen Luftzug trocknen lassen und in 1 ml EtOH + 1 ml wässrige 3 % HCL bzw. 5 % NaOH aufnehmen).
Die Absorptionsmaxima stimmen mit denen aus der Literatur fast überein (je nach Quelle, 535 und 470 laut unterer).
Da der Rohextrakt natürlich noch andere lipophile Substanzen enthält (Steroide, Membranbestandteile, lipophile Aminosäure usw.) ist das Spektrum natürlich nicht das des Reinstoffes. Protokolle für aufwändigere Reinigungen (Säulenchromatographie usw.) finden sich aber im Internet in diversen Papern.
"Cloning and Expression in Escherichia coli of Serratia marcescens Genes Encoding Prodigiosin Biosynthesis"
STEVEN A. DAUENHAUER,t RICHARD A. HULL, AND ROBERT P. WILLIAMS*
JOURNAL OF BACTERIOLOGY, June 1984, p. 1128-1132 Vol. 158, No. 3
doi 0021-9193/84/061128-05$02.00/0
1984, American Society for Microbiology

Prodigiosin.jpg (185.46 KB . 991x759 - angeschaut 562 Mal)EDIT. Warum kann man hier keine Bilder direkt einbinden?
Grüße Hyperion
Edit by Mephisto: Bild hochgeladen (Tipp: PNG = Vektorgrafiken, JPG = Fotos).